Тестове за ботулизъм

Тестовете за ботулизъм представляват различни методи за откриване на ботулиновия токсин в секрети (кръв, ликвор, раневи секрет, изпражнения, повърнат материал) от инфектиран с ботулизъм човек.

Ботулизмът е остра животозастрашаваща инфекция, протичаща с характерни парализи, предизвикани от ендотоксина, продуциран от бактерията Clostridium botulinum.

Ботулизмът е хранителна токсикоинфекция.

Clostridium botulinum представлява грам положителна, спорообразуваща, анаеробна, слабоустойчива във външната среда бактерия.

Бактерията продуцира термолабилен (неустоичив на топлина) екзотоксин, който е най-силната биологична отрова. Състой се от невротоксин и хемаглутинин.

Заболяването при човек се предизвиква от тип А, В и Е, много рядко от F, G.

Заравяването става при консумация на контаминирани със спори на бактерията консервирани храни, месо, заленчуци, риба.

Опасност има при консервирането на контаминирани храни при неподходящи условия и при недостатъчната термична обработка.

Заразяването става и чрез проникване на спорите на бактериите през рани по тялото, а при кърмачета – при консумиране на мед, контаминиран със спори.

В кои случаи се препоръчва провеждането на изследването?

При съмнения за ботулизъм:

• диспептичен синдром - коремни болки, гадене, повръщане;

• токсични симптоми – главоболие, ксеростомия (сухота в устната кухина), мускулна слабост, чувство на задух в гърдите;

• офталмоплегичен синдром - двойно и замъглено виждане, двустранна птоза на клепача, образите са двойни, невъзможност за четене;

• булбарни парализи – промени в говора, гълтането, афония;

• вегетативни смущения – ксеростомия, сухота в очите, отслабена перисталтика;

• вяли парализи и парези;

Съмнения за ботулизъм има когато пациента  е консумирал скоро консервирани храни или е получил отворена рана.

При кърмачета със съмнение за ботулизъм е важно да се знае дали има консумация на мед.

Откриването на ботулиновият токсин се осъществява като се използват следните тестове за ботулизъм (ботулинов токсин):

Флуоресцентни тестове:

         1. Time-resolved тест -TRF тестовете са разработени за болулизмови типове А и В и се основават на ELISA (ензимо-свързан имуосорбентен тест). Тестове използват специфични антитела за улавяне на предварително обвързано със стрептавидин антитяло. Извършва се реакция антиген антитяло. Детекторът за  антитела произвежда флуоресцентен сигнал, след добавянето на разтвор, с наличие на токсина.

          2. Флуорометричен биосензор за откриване на ботулинов токсин тип A и G. Използва се за откриване на наличие на невротоксин.

Нон - флуоресцентни тестове:

         1. Нова модификация на ELISA на базата на имобилизирани синтетични субстрати за ботулинов токсин като SNAP-25 и могат да се определят типовете А и В. Методът използва ензим-белязани антитела. Тестовете са много специфични и не реагират с други  кръстосани невротоксини. Тяхната чувствителност варират между 0,6 и 4,5 нанограма.

         2. Микромеханосенсорен метод- уникален и изключително бърз метод изисква микроскоп и механосесензор.

         3. Масс спектрометрия – метод за анализ на вещество чрез определяне на отношението на масата към заряда (качествен анализ) и количеството заредени частици (количествен анализ), образуващи се при въздействие върху веществото с цел йонизация; изключително чувствителни и бързо развиващ се метод, който се използва за идентификация на протеини, може да бъде адатиран за откриване на бактериални токсини.

Други методи:

• PCR – полимеразна ензимна реакция - експериментален метод, който се използва в медицината, състои се в ин витро ензимно намножаване (амплификация) на избрани нуклеотидни последователности, с цел да се намерят търсените ДНК последователности;

• Неутрализационен тест върху мишки е най-често диагностичен тест за ботулинов токсин и е изключително чувствителен. Този биологичен тест се извършва при мишки и може да открие по-малко 0.03 нанограма на токсина. Неудобството е че тестът отняма няколко дни. Този метод датира от самото начало на проучвания на ботулиновите отравяния. Тестът позволява откриване на токсични свойства на екзотоксина също така идентифицира типа на специфичен антисерум, необходим за медицинско лечение.

Необходима ли е предварителна подготовка?

Преди извършването на тестовете за ботулизъм не е необходима предварителна подготовка от страна на пациента.

Вземане на материал за изследване – кръв, раневи секрет или ликвор се извършва от лекар според установени правила на работа.

Метод на провеждане на изследването:

За различните методи, които се използват за откриване на ботулинов токсин в секрети от пациенти има специфични техники на извършване, които са обект на молекулярните биолози и специалистите в специализирани лаборатории.

Какво ще усещате по време на изследването?

По време на венепункцията, с която се цели вземане на кръв необходима за изследването може да усетите леко убождане от иглата и дискомфорт.

По време на вземане на раневи секрет от рана може да усетите лека болка и дискомфорт.

Има ли рискове от провеждането на изследването?

Няма рискове от провеждане на изследването за ботулизъм

Рискове от извършване на изследването при някои пациенти са:

• кървене от мястото на вземане на кръв;

• образуване на хематом на мястото на вземане на кръв;

• възникване на инфекция;

• при неправилно вземане на ликвор при ликворната пункция – засягане на гръбначномозъчни нерви в областта на пукцията;

Резултати от проведеното изследване:

При всички тестове, които се използват за откриване на ботулинов токсин резултатите от изследванията за различни по стойност и мерни единици, поради раличието на методиките.

Кога не трябва да провеждате изследването?

Няма контраиндикации за провеждане на изследването.

Ако при пациентът има опасност от кървене след венепункция, такава не се извършва.

Ако има контраиндикации за извършване на ликворна пункция, то тя не се извършва.